HPLC常見問題的解答

　　一、問:用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？

　　答:關于漂移問題：

　　1． 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2． 流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等

　　3． 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡

　　關于快速變化問題

　　1． 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2． 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

　　3． 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

　　二、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？</B>

　　答: 1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

　　2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子

　　三、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法</B>

　　答: 1． 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

　　2． 樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學性質改變流動相或柱子

　　3． 樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學性質調整波長或改換檢測器

　　4． 檢測器衰減太多。調整衰減即可。

　　5． 檢測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)

　　6． 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

　　7． 檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

　　8． 記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。

　　9． 流動相流量不合適。調整流速即可。

　　10． 檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

　　四、問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？</B>

　　答：原因可能有：

　　1． 泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；

　　2． 比例閥失效，更換比例閥即可；

　　3． 泵密封墊損壞，更換密封墊即可；

　　4． 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；

　　5． 系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可；

　　6． 梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

　　五、問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么？</B>

　　答：柱壓過高是HPLC柱用戶常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

　　1． 拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

　　2． 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

　　3． 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

　　4． 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。 一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題